Unsere Lösungen im Bereich der Mikroskopie und Life Science wurden entworfen, um Anwendungen von der Grundlagenforschung bis zur Arzneimittelforschung und präklinischen Studien zu unterstützen.
Die High-Content-Analyse-Systeme (HCA) und konfokalen Dual-Spinning-Disk-Technologien von Yokogawa werden im Bereich der regenerativen Medizin, Arzneimittelforschung und Präzisionsmedizin eingesetzt, wo sie schnelles, hochauflösendes Live-Cell-Imaging ermöglichen.
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Konfokale Spinning Disk (Rotationsscheibe) CSU
Mit unserem urheberrechtlich geschützten Dual-Spinning-Disk-Design ausgestattet, transformiert das konfokale Scanning-System von Yokogawa optische Mikroskope, indem es Echtzeit-Live-Cell-Imaging ermöglicht.
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High-Content-Analysesystem CellVoyager
Unsere High-Content-Analyse-Systeme (HCA) verwenden eine leistungsstarke Analysesoftware, um ein möglichst breites Spektrum an Forschungsanwendungen abzudecken; von der Grundlagenforschung bis hin zum komplexen Wirkstoff-Screening.
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OpreX Informatics Manager
Yokogawa Electric's OpreX Informatics Manager is an information-integrated solution that goes beyond electronic lab notebooks by optimizing human and material resource management in terms of skills and scheduling.
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FlowCam Flow-Imaging-Mikroskopie (Dynamische Bildanalyse)
Mit der FlowCam können Sie Partikel mittels automatisierter Bildgebungstechnologie genau, zuverlässig und schnell analysieren. Damit verbessern Sie Ihre Forschung, erhöhen die Produktivität und sichern die Qualität.
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Einzelzellanalyse-Lösung Single Cellome™ (SU10)
Unsere Single Cellome™ Einheit ist mit einer minimalinvasiven Nanopipette ausgestattet. Mittels der Nanopipette lassen sich Zielsubstanzen in Einzelzellen injizieren, ohne die Zelle zu beschädigen. Damit eignet sich die SU10 hervorragend für die Transfektion.
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Lösungen für das biologische Kontaminationsmanagement
Yokogawa ist ein Befürworter einer robusten genetischen Testmethode für Lebensmittel-, Getränke- und Arzneimittelkontaminationen, die mit überwältigender Geschwindigkeit und Einfachheit durchgeführt werden kann.
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Grundsätze der Konfokalen Spinning Disk (Rotationsscheibe)
Konventionelle Konfokalmikroskope nutzen einen einzigen Laserstrahl, um die Probe zu scannen. Die CSU scannt das Sichtfeld mit ungefähr 1.000 Laserstrahlen unter Verwendung einer Mikrolinsen-erweiterten Nipkow-Scheibe: kurz gesagt: Die CSU kann 1.000 mal schneller scannen.
Unter Verwendung einer Scheibe, die Mikrolinsenarrays enthält, ist es uns in Verbindung mit der Nipkow-Scheibe gelungen, die Lichteffizienz erheblich zu verbessern und so das konfokale Echtzeit-Imaging von Lebendzellen zu ermöglichen.
Der erweiterte und gebündelte Laserstrahl beleuchtet die obere Scheibe, die ungefähr 20.000 Mikrolinsen enthält (Mikrolinsenarray-Scheibe). Jede Mikrolinse fokussiert den Laserstrahl auf das ihr entsprechende Spiralloch. Dadurch wird die Laserintensität, welche ein Spiralloch in der Spirallochscheibe (Nipkow-Scheibe) passiert, effektiv erhöht.
Mit der Mikrolinse kann die Rückstreuung des Laserlichts auf die Oberfläche der Pinhole-Disk signifikant reduziert werden, wodurch das Signal-Rausch-Verhältnis (S/N) konfokaler Bilder erheblich erhöht wird.
Ungefähr 1.000 die Spirallöcher passierende Laserstrahlen füllen die Öffnung der Objektivlinse und werden dann auf die Brennebene fokussiert. Die von der Probe generierte Fluoreszenz wird von der Objektivlinse eingefangen und zurück auf die Pinhole-Disk fokussiert, durch diese Löcher übertragen, um unscharfe Signale auszuschließen, durch den dichroitischen Spiegel umgelenkt, der sich zwischen Mikrolinsenarray-Scheibe und der Nipkow-Scheibe befindet, um das Fluoreszenzsignal des reflektierten Lasers zu teilen, durch den Emissionsfilter geleitet und dann in die Bildebene im Okular oder in der Kamera fokussiert.
Die Mikrolinsenarray-Scheibe und die Nipkow-Scheibe sind physikalisch aneinander befestigt und rotieren mit hoher Geschwindigkeit, um das gesamte Sichtfeld zu scannen. Dadurch wird ermöglicht, konfokale fluoreszierende Bilder in Echtzeit durch das Okular des CSU-Kopfes zu sehen.
Im Vergleich zum konventionellen Einzelpunkt-Scanning erfordert das Multistrahl-Scanning durch die CSU ein erheblich niedrigeres Maß an Lichtintensität pro Einheitsbereich; dies bedeutet eine erheblich reduzierte Photobleiche und Phototoxizität bei Lebendzellen.
Konfokale Spinning Disk (Rotationsscheibe)
Mikrolinsen-erweiterte Nipkow-Scheiben-Technologie
Vergleich der Scan-Methode
Punkt-Scanning
Scandauer 1 Zeile = 1 [ms]
1000 Zeilen / Bild
Scanzeilen = 1000 [Zeilen]
1 × 1000 = 1000 [ms]
Scheiben-Scanning mittels CSU
Rotationsgeschwindigkeit = 10000 [min−1] = 41,7 [s−1]
30° Rotation / Image
1÷( 41,7 × 30/360 )= 0,5 [ms]
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August | 20.2020 |
Entdeckung Potentieller Covid-19-Therapien mittels High-Content-Screening Datum: Mittwoch, 26. August 2020 Zusammenfassung: |
Juni | 5.2020 |
Verkaufsfreigabe: High-Throughput Cytological Discovery System CV8000: Die 20x-Wasser-Immersionslinse steht nun kommerziell zur Verfügung. |
März | 18.2020 |
Verkaufsfreigabe: Einzelzellanalyse-Lösung Single Cellome Unit SU10 |
Januar | 20.2020 |
Verkaufsfreigabe: Ein Update der High-Content-Analyse-Software CellPathfinder mit Deep-Learning-Funktion steht nun kommerziell zur Verfügung. Link zu Produkten High-Content-Analyse-Software CellPathfinder |
Januar | 15.2020 |
Society for Laboratory Automation and Screening (SLAS) 2020 25.–29. Januar 2020 Wir werden das High-Content-Analyse-System „CellVoyager CQ1“ ausstellen. Link zu Produkten -Poster- 1207-C: |
Dezember | 6.2019 |
Verkaufsfreigabe: Eine Flat-Top Beam-Shaper-Option CSU-W1 Uniformizer |
November | 18.2019 |
ASCB/EMBO 2019 8.–10. Dezember 2019 Wir werden die konfokale Spinning Disk (Rotationsscheibe) „CSU-W1 SoRa“ und das High-Content-Analyse-System CellVoyager CQ1 ausstellen. Link zu Produkten -Tech Talks- 9. Dezember, 15:00–16:00 Uhr – Theater 2, Lernzentrum Uniformizer, ein neuer Flat-Top-Strahlformer für CSU-W1 & Einführung in neuen Ansatz der Einzelzellanalyse Moderator: Naoki Ando: Produktspezialist für CSU, Masahiro Kajita: Projektleiter von „Single Cellome“ Yokogawa arbeitet an weiteren Verbesserungen um Wissenschaftlern im Bereich der Biologie die besten Produkte anzubieten. Bisher hat die CSU den Wunsch der Wissenschaftler nach einer schnellen Aufnahme von breiten, klaren und hochauflösenden Bildern erfüllt. Jetzt stellen wir die neue „Uniformizer“-Option unseres Produkts „CSU-W1“ vor. Diese Einheit vereinheitlicht die Laserbeleuchtung und erlaubt quantitative Bildgebung. Dadurch wird eine umfassende nahtlose Bildmontage zwischen allen Feldern ermöglicht. Des Weiteren stellt sich Yokogawa einer neuen Herausforderung im nächsten Bereich, dem Bereich der Einzelzellanalyse. Hierzu wurde versuchsweise ein Prototyp eines automatisierten Probeentnahmesystems zur Einzelzellentnahme geschaffen, mit dem es möglich ist, die molekulare Charakteristik jeder einzelnen Zelle zu untersuchen. In diesem Fachgespräch werden 1) „Uniformizer“ und 2) ein neuer Ansatz zur Einzelzellanalyse vorgestellt, welcher mit konfokaler Mikroskopie durchführbar sein könnte. |
Oktober | 3.2019 |
SLAS 2019 Erweiterte 3D-Menschmodelle und High-Content-Analyse-Symposium 12.–21. Oktober 2019 Wir werden das High-Content-Analyse-System „CellVoyager CQ1“ ausstellen. Link zu Informationen Erfahren Sie mehr über die SLAS 2019 Erweiterte 3D-Menschmodelle und High-Content-Analyse-Symposium. |
April | 8.2019 |
FOM 2019 14.–17. April 2019 Wir werden die konfokale Spinning Disk (Rotationsscheibe) „CSU-W1 SoRa“ ausstellen. Link zu Produkten |
Januar | 16.2019 |
SLAS 2019 4.–6. Februar 2019 Wir werden das High-Content-Analyse-System „CellVoyager“ ausstellen. Link zu Produkten * Eine Posterpräsentation ist geplant. Weitere Informationen werden mit Feststehen bekanntgegeben. |
Oktober | 24.2018 |
ASCB / EMBO 2018 9.–11. Dezember 2018 -Tech Talks- 9. Dezember, 15:00–16:00 Uhr – Theater 2, Lernzentrum Konfokales Superauflösungs-Scanning-System CSU-W1 SoRa Moderator: Takuya Azuma: Chefdesigner von CSU-W1 SoRa, Yokogawa wird unser brandneues Produkt „CSU-W1 SoRa“ vorstellen. Hierbei handelt es sich um ein Rotationsscheiben-basiertes konfokales superauflösendes Scanning-System. In diesem Gespräch werden wir Merkmale und Prinzipien dieses Produkts vorstellen und schöne Bildbeispiele zeigen, die mit „CSU-W1 SoRa“ aufgenommen wurden. Merkmale von „CSU-W1 SoRa“: 1) XY-Auflösung von ungefähr 120 nm. Die XY-Auflösung wurde mittels konfokaler Spinning-Disk-Technologie um ungefähr das 1,4-fache der optischen Grenze verbessert. Des Weiteren wird eine abschließende Auflösung von ungefähr dem Zweifachen der optischen Grenze durch Dekonvolution verwirklicht. 2) Ideal für Superauflösendes Live-Cell-Imaging Genau wie das CSU (Konfokales Scanning-System) kann auch das Hochgeschwindigkeits-Echtzeit-Imaging mit Superauflösung durchgeführt werden. Des Weiteren ist Live-Cell-Imaging unter Reduktion der Photobleiche und Phototoxizität möglich. 3) Das CSU is einfach anzuwenden. Superauflösende Bilder können ohne irgendeine besondere Vorbereitung der Stichprobe in Echtzeit verfolgt werden. Tieflagen-Beobachtung wird durch optische Unterteilung mittels konfokaler Technik ermöglicht. 4) Von CSU-W1 erweiterbar. Wenn Sie bereits über CSU-W1 verfügen, kann die SoRa Disk einfach hinzugefügt werden. |
September | 14.2018 |
Verkaufsfreigabe: High-Content-Analyse-Software CellPathfinder |
Juli | 27.2018 |
Verkaufsfreigabe: Konfokaler Hochgeschwindigkeits- und Superauflösungs-Scanner CSU-W1 SoRa |
Juni | 11.2018 |
SLAS 2018 Europe |
März | 01.2018 |
Verkaufsfreigabe: High-Content-Datenmanagementsystem CellLibrarian |
Dezember | 29.2017 |
SLAS 2018 3.–7. Februar 2018 |
Dezember | 29.2017 | Vertriebsneuigkeiten: Die Einstellung von CellVoyagerTM High-Throughput Cytological Discovery System CV7000S |
September | 05.2017 |
Verkaufsfreigabe: CellVoyagerTMHigh-Throughput Cytological Discovery System CV8000 |
Januar | 19.2017 |
SLAS High-Content Screening Conference 2017 Erfahren Sie mehr über die SLAS High-Content Screening Conference 2017. |
April | 04.2016 |
Posterpräsentation auf dem Kongress 3D Cell Culture 2016, 19.–21. April 2016, Konzerthaus Freiburg, Deutschland Yokogawa Electric Corporation stellte auf dem Kongress „3D Cell Culture 2016: How close to ‘in vivo’ can we get? Models, Application & Translation“ (3D Zellkultur 2016: „Wie nah an „in vivo“ können wir herankommen? Modelle, Applikationen & Übersetzung) Daten vor, die mit dem konfokalen Bildzytometer CQ1 erfasst wurden. Auf dem Poster werden die Resultate des 3D-Live-Cell-Imaging und der Analyse der Migration und Netzwerkbildung von HUVEC-Zellen in einem mehrschichtigen Zellrasen gezeigt. Die Resultate legen dar, dass CQ1 ein exzellentes Forschungswerkzeug im Bereich der regenerativen Medizin und des Arzneimittel-Screenings ist. * Die Daten wurden vom BioProcess Systems Engineering Lab., Abt. Biotech., Grad. Sch. Eng., der Universität Osaka zur Verfügung gestellt. |
Februar | 10.2016 | Yokogawa schließt Vertriebsvereinbarung mit Optec, LLC zum Vertrieb des konfokalen quantitativen Bildzytometers CQ1 auf den OPTEC-Geschäftsmärkten ab. |
Oktober | 01.2015 | Verkaufsfreigabe: Software für ungefärbte Morphologieanalyse CellActivision |
Publikationen
Visualizing the cell behavioral basis of epithelial morphogenesis and epithelial cancer progression
Faster, Deeper, and Clearer -in vivo molecular imaging technology-
Discovering the Basic Principles of Life through the Live Imaging of C. elegans
Closing in on Neuronal Circuit Dynamics through High-speed, fMCI.
New Era in Manmmalian Genetics Research: To utilize the same embryo after long-time 3D observation!
Getting Closer to “Plant Cell World”with High-speed Live Imaging and Image Information Processing.
Spinning Disk Confocal Microscopy for Quantitative Imaging and Multi-Point Fluorescence Fluctuation Spectroscopy.
On-site manipulation of protein activities: Understanding intricate cell signaling pathways.
Use of the spinning disk confocal at the Harvard Medical School microscopy core.
In recent years, single cell analysis has become increasingly popular due to the new development of advanced and high sensitivity analytical methods.
SS2000 is a revolutionary system that can sample subcellular components and a whole cell by using a glass capillary tip with an inner diameter of a few μm while imaging with a confocal microscope.
This application note provides an example of single cell RNA sequencing scRNA seq) from cells sampled by SS2000, and the data is comparable to conventional methods.
In recent years, single-cell studies have become increasingly popular as analytical techniques have become more sensitive and widespread.
The SS2000 is a revolutionary device that can sample intracellular components and single cells using glass capillary tips with a diameter of several micrometers while performing confocal microscope imaging. These application notes introduce examples of sampling for various cell types.
In recent years, research on single cells has become increasingly popular. With more sensitive analytical techniques, it has become possible to analyze specific intracellular components such as organelles, even at the single-cell level.
The SS2000 is an innovative system that can sample subcellular intracellular components using a glass capillary having a tip diameter of only a few micrometers while imaging with a confocal microscope.
In this application note, we introduce a case where after drug treatment, intracellular components were sampled by the SS2000 and analyzed by single-cell mass spectrometry.
The SS2000 is a revolutionary system that allows both confocal imaging and sampling of targeted intracellular components or single cells using a glass tip with an inner diameter of a few micrometers. The SS2000 includes an incubator as well as highcontent imaging functions, such as long time-lapse observation, machine learning, and label-free analysis.
The SU10 is an innovative device that delivers target substances directly into cells or into nuclei with a nanopipette that has a tip outer diameter as small as a few tens nm.
This application note shows a case study of sampling and analysis with the SS2000 from cells delivered intracellularly with the SU10.
Comparison between CSU and conventional LSM in 4D movies.
In recent years, single-cell studies have become increasingly popular, leading to the development of instruments capable of spatial omics - the integration of samples' 3D locations and their omics data. The SS2000 is a revolutionary device that can collect intracellular components at the single-cell level and image the samples using a confocal microscope. In this application note we introduce the research performed by Dr. Okada of The University of Tokyo, who established an intra single living cell sequencing (iSC-seq) method which uses SS2000 to sample intracellular components from osteoclasts (a type of multinucleated giant cell) and analyzes them through next-generation sequencing.
To investigate interactive dynamics of the intracellular structures and organelles in the stomatal movement through live imaging technique, a CSU system was used to capture 3-dimensional images (XYZN) and time-laps images (XYT) of guard cells.
Cell stage categorized using FucciTime lapse imaging of Fucci-added Hela cells was conducted over 48 hrs at 1 hr intervals. Gating was performed based on the mean intensities of 488 nm and 561 nm for each cell. They were categorized into four stages, and the cell count for each was calculated.
The CV8000 nuclear translocation analysis software enables the analysis of changes in the localization of signal molecules that transfer between cytoplasm and nuclei, such as proteins. The following is an example of the translocation analysis of NFκB, a transcription factor.
Long-term observation of mitosis by live-cell microscopy is required for uncovering the role of Cohesin on compartmentalized nuclear architecture which is linked to nuclear functions.
To perform long term observation of mitosis devices are needed that have low phototoxic effects on living cells and enable high speed imaging. By using the CSU W-1 confocal scanner unit for time lapse imaging entrance into mitosis, mitotic progression and exit can be examined.
The CQ1 confocal image acquisition mechanism with the distinctive CSU® unit has a function to sequentially acquire fine cell images along the Z-axis and capture information from the entire thickness of
cells which include heterogenic populations of various cell cycle stages. In addition, saved digital images can be useful for precise observation and analysis of spatial distribution of intracellular molecules.
The CQ1 capability to seamlessly analyze images and obtain data for things such as cell population statistics to individual cell morphology will provide benefits for both basic research and drug discovery
targetingM-cell cycle phase.
- Colony Formation
- Scratch Wound
- Cytotoxicity
- Neurite Outgrowth
- Co-culture Analysis
- Cell Tracking
CV1000 clears the hurdle in Live Cell Imaging
All-in-one Live cell imaging solution
Faster, Brighter, and More Versatile Confocal Scanner Unit
Welcome to The New World of High Content Analysis
High-throughput Cytological Discovery System
Cell clusters are directly measured with high-throughput 3D imaging Confocal Quantitative Image Cytometer
Wide and Clear
Confocal Scanner Unit
In recent years, research on single cells has become increasingly popular, but with more sensitive analytical techniques, it has become possible to analyze specific intracellular components such as organelles at the single-cell level.
The SS2000 is an innovative system that can sample intracellular components at the single-cell level using a tip (glass capillary) with a diameter of several micrometers while imaging with a confocal microscope. In this application note, we introduce a case in which intracellular components were sampled by SS2000 and genetic analysis was performed by qPCR.
Fluorescent ubiquitination-based cell cycle indicator (Fucci) is a set of fluorescent probes which enables the visualization of cell cycle progression in living cells.
List of Selected Publications : CSU-W1
List of Selected Publications : CQ1
List of Selected Publications : CSU-X1
List of Selected Publications : CV8000, CV7000, CV6000
This "Tutorial" provides overview of this software, from installation through data analysis.
In this tutorial, a method for analyzing ramified structure, using CellPathfinder, for the analysis of the vascular endothelial cell angiogenesis function will be explained.
In this tutorial, a method for analyzing ramified structure, using CellPathfinder, for the analysis of the vascular endothelial cell angiogenesis function will be explained.
In this tutorial, spheroid diameter and cell (nuclei) count within the spheroid will be analyzed.
In this tutorial, we will learn how to perform time-lapse analysis of objects with little movement using CellPathfinder, through calcium imaging of iPS cell-derived cardiomyocytes.
In this tutorial, we will identify the cell cycles G1-phase, G2/M-phase, etc. using the intranuclear DNA content.
In this tutorial, image analysis of collapsing stress fibers will be performed, and concentration-dependence curves will be drawn for quantitative evaluation.
In this tutorial, we will observe the change in number and length of neurites due to nerve growth factor (NGF) stimulation in PC12 cells.
In this tutorial, intranuclear and intracytoplasmic NFκB will be measured and their ratios calculated, and a dose-response curve will be created.
In this tutorial, we will learn how to perform cell tracking with CellPathfinder through the analysis of test images.
In this tutorial, using images of zebrafish whose blood vessels are labeled with EGFP, tiling of the images and recognition of blood vessels within an arbitrary region will be explained.
In this tutorial, we’ll compare positive and negative condition for the count and total area of lipid droplets by adding the oleic acid or Triacsin C.
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Bulletins
- CQ1 Bulletin (21.1 MB)
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Die Unternehmensvision von Yokogawa besagt, dass das Unternehmen bis 2050 Netto-Null-Emissionen erreichen, das Wohlergehen aller Menschen sicherstellen und den Übergang zu einer Kreislaufwirtschaft vollziehen möchte. Um diese Bemühungen zu unterstützen, hat die Life-Gruppe eine kompatible Vision entwickelt.
YOKOGAWA wird zur technologischen Entwicklung beitragen, insbesondere im Bereich der Mess- und Analysewerkzeuge, um eine Welt zu schaffen, in der sich die Forscher zunehmend auf die aufschlussreiche Interpretation von Daten konzentrieren und die Biowissenschaften zum Nutzen der Menschheit voranbringen.
YOKOGAWA ist bestrebt, intelligente GMP-Fertigungsanlagen einzurichten, die eine gleichbleibende Qualität und Versorgung gewährleisten, während gleichzeitig Industrieabfälle vermieden, die Produktivität erhöht und stets hochwertige Bauteile und Materialien verwendet werden.
YOKOGAWA creates autonomous operations with high-efficiency automation and optimization that allows growth with minimal deployment of manpower.
In this webinar, Professor Jonny Sexton discusses a pipeline, developed in the Sexton lab, for the quantitative high-throughput image-based screening of SARS-CoV-2 infection to identify potential antiviral mechanisms and allow selection of appropriate drug combinations to treat COVID-19. This webinar presents evidence that morphological profiling can robustly identify new potential therapeutics against SARS-CoV-2 infection as well as drugs that potentially worsen COVID-19 outcomes.
News
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Pressemeldung Feb 15, 2024 Für hochauflösende Analysen: Yokogawa stellt CellVoyager-System CQ3000 vor
Der CQ3000 ist eine Erweiterung der CellVoyager-Serie, die die Entwicklung neuer Medikamente beschleunigen und die Grundlagenforschung in der Biologie und Medizin rationalisieren wird. Das CellVoyager High-Content-Analysis-System CQ3000 kann hochauflösende 3D-Mikroskopbilder von lebenden Zellkulturen mit hoher Geschwindigkeit aufnehmen.
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Pressemeldung Jul 17, 2023 Integrierte Verwaltung von Versuchs- und Forschungsdaten in der Cloud: Yokogawa bringt OpreX Informatics Manager auf den Markt
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Pressemeldung Mr 23, 2020 Intelligente Zelltechnologie: Yokogawa entwickelt „SU10 Single Cellome™“-Instrument
Der Einzelzell-Manipulator mit der Bezeichnung „SU10 Single CellomeTM“ nutzt eine Nanopipette, mit der sich Substanzen wie Gene oder Medikamente injizieren und intrazelluläre Materialien aus einzelnen Zellen extrahieren lassen. Das SU10 wurde von Yokogawa speziell für biologische Forschungseinrichtungen entwickelt.
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Pressemeldung Dez 1, 2021 Yokogawa entwickelt Single Cellome System 2000 für die subzelluläre Probenahme
Yokogawa hat eine Lösung für die Einzelzellanalyse entwickelt, die hochauflösende, mit einem konfokalen Mikroskop aufgenommene Bilder nutzt, um automatisch und präzise Proben bestimmter Zellen und intrazellulärer Komponenten zu sammeln.
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Pressemeldung Dez 3, 2020 Unterstützung der Forschung zur Arzneimittelentwicklung: Yokogawa und InSphero schließen Partnerschaftsabkommen
- Das Biotechnologieunternehmen InSphero AG ist Pionier in der Entwicklung von 3D-in-vitro-Technologien für die Arzneimittelentwicklung. Die Yokogawa Electric Corporation und die InSphero AG haben eine Partnerschaft vereinbart, um Methoden für den Einsatz der High-Content-Analyse1 (HCA) in der Arzneimittelforschung und -sicherheitsbewertung zu etablieren und weiterzuentwickeln.-
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